Jefe de Laboratorio: Irma Betancourt, Ocea.

(INMUNOLOGIA)

La primera fase del trabajo en el area de Inmunología ha consistido en el desarrollo de ensayos de evaluación del estado fisiológico del camarón Penaeus vannamei. Estos ensayos tendrían su aplicación inmediata en la estimación de modificaciones fisiológicas provocadas por alteraciones en las condiciones de cultivo. A mediano y largo plazo los marcadores inmunitarios reforzarían los programas de domesticación del camarón al permitir utilizar criterios de resistencia en la selección de progenitores para el mejoramiento genético.

Hasta 1998 se han desarrollado 7 pruebas cuantitativas, miniaturizadas de inmunoevaluación, siendo estas el hemograma completo, realizado mediante la observación de muestras frescas en un microscopio óptico invertido, provisto de un accesorio de contraste de fases. La cuantificación del anión superóxido (O2-) por medio de la técnica de reducción del NBT. La actividad antibacteriana del plasma, detectada y cuantificada por medio de un método turbidométrico cuyo principio se basa en la medición espectrofo-metrica de suspensiones bacterianas en presencia o ausencia de plasma de camarón. La cuantificación de la actividad fenoloxidasa (PO). La cuantificación de proteínas plasmáticas totales mediante el método de Lowry y finalmente la detección de 3 proteínas inmunitarias (Proteina de coagulación, aglutinina, a 2 macroglobulina) mediante la técnica ELISA con anticuerpos monoclonales específicos.

Figura 1: Ensayos de inmunoevaluación disponibles para el camarón Penaeus vannamei.

 

Figura 2: Los ensayos de inmunoevaluación han sido adaptados a microplacas .

 

Estos ensayos, a excepción del hemograma, han sido adaptados a microplacas (Figuras 1 y 2), con la finalidad de que cumplan los requisitos de ser económicos tanto en material biológico, como en reactivos además de automatizables y cuantitativos (Figura 3).

Figura 3: Los ensayos inmunitarios son cuantitativos, en el centro se dispone para esto de un lector de microplacas .

La segunda fase del trabajo, iniciada en 1997 ha consistido en evaluar el significado clínico de los efectores inmunitarios medidos y cuantificados por los ensayos desarrollados, para esto se han realizado diferentes bioensayos en condiciones controladas de laboratorio. En primer lugar se sometió a camarones juveniles a diferentes dietas, con la finalidad de comprobar por una parte, si las pruebas de inmunoevaluación eran capaces de revelar modificaciones fisiológicas motivadas por dietas inadecuadas y por otra parte si era posible identificar marcadores inmunitarios de estrés nutricional. Los resultados obtenidos revelaron que prácticamente todas las pruebas eran capaces de mostrar modificaciones en la condición de los animales, siendo la concentración de proteínas plasmáticas y el hemograma completo las que mejor reflejaron las modificaciones en la dieta. Un segundo tipo de bioensayos consistió en someter a los camarones a una intoxicación, por medio de la inyección del pesticida tilt . Los resultados mostraron profundas alteraciones fisiológicas en los animales revelando además que la técnica de reducción del NBT sería una herramienta útil para estudiar las alteraciones metabólicas producidas por xenobióticos.

A fin de completar los estudios clínicos de los ensayos inmunitarios, actualmente se está trabajando en infecciones experimentales en las cuales, los animales son sometidos a procesos infecciosos con la finalidad de identificar inmunomarcadores de resistencia. Otro aspecto abordado en 1998 fue el estudio de inmunomoduladores sobre la respuesta inmune de P. vannamei, los resultados fueron muy alentadores revelando que existen sustancias que pueden actuar como inmunoestimulantes sobre la actividad antibacteriana y la actividad PO del camarón. El efecto protector de las mismas es una nueva perspectiva de trabajo del área de inmunología.

Los conocimientos hasta ahora obtenidos sobre la respuesta inmune del camarón, utilizando los ensayos de inmunoevaluación, permitirían clasificar los efectores inmunitarios en dos grupos. Modificaciones en el primero serían un reflejo de alteraciones fisiológicas, deficiencias nutricionales por ejemplo, mal o buen estado de salud. El segundo grupo tiene que ver mas de cerca con la respuesta inmune del camarón y modificaciones en este grupo reflejarían situaciones de excitación inmunitaria (procesos infecciosos, inmunoestimulación) o inmunodepresión.

Perspectivas

Las proyecciones futuras del área de inmunología implican, por una parte el estudio de la heredabilidad de la respuesta inmune, con la finalidad de abordar su aplicación en programas de selección genética. Por otra parte la aplicación de los ensayos de inmunoevaluación en controles zoosanitarios conlleva a abordar dos aspectos, el primero pasa por el estudio del efecto de diferentes condiciones de cultivo sobre la respuesta inmune y el estado fisiológico de los camarones. El segundo aspecto implica el estudio de inmunomoduladores, sean estos aditivos nutricionales, o modificaciones ambientales que permitan controlar y/o modificar inmunodeficiencias potencialmente peligrosas en las piscinas de cultivo.